酸性磷酸酯酶動力學性質(zhì)分析

米氏常數(shù)（Km）和最大反應(yīng)速度（Vm）的測定

[原理]

在溫度、pH及酶濃度恒定的條件下，底物濃度對酶促反應(yīng)的速度有很大的影響。在底物濃度很低時，酶促反應(yīng)的速度（v）隨底物濃度的增加而迅速增加；隨著底物濃度的繼續(xù)增加，反應(yīng)速度的增加開始減慢；當?shù)孜餄舛仍黾拥侥撤N程度時，反應(yīng)速度達到一個極限值（Vmax）。

底物濃度與反應(yīng)速度的這種關(guān)系可用Michaelis-Menten方程式表示：

式中

v——反應(yīng)速度；

Km——米氏常數(shù)；

Vmax——大畢酶反應(yīng)最大速度；

[S] ——底物濃度。

從米氏方程式可見：米氏常滾敏芹數(shù)Km等于反應(yīng)速度達到最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度，米氏常數(shù)的單位就是濃度單位(mol/L或mmol/L)。

在酶學分析中，Km是酶的一個基本特征常數(shù)，它包含著酶與底物結(jié)合和解離的性質(zhì)。Km與底物濃度、酶濃度無關(guān)，與pH、溫度、離子強度等因素有關(guān)。對于每一個酶促反應(yīng)，在一定條件下都有其特定的Km值，因此可用于鑒別酶。

測拿高定Km、Vmax，一般用作圖法求得。作圖法有很多，最常用的是Linewaver-Burk作圖法，該法是根據(jù)米氏方程的倒數(shù)形式，以1/v對1/[S]作圖，可得到一條直線。直線在橫軸上的截距為 -1/Km，縱截距為1/Vmax，可求出Km與Vmax。

米氏常數(shù)測定實驗中的注意事項有:

1. 取樣量一定要準確。 2. 反應(yīng)時間一定要準確。 3. 加酶前后,試劑要混勻。 4. 參比要先加NaOH,后加酶